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a. 基质胶包被：

(a) 将基质胶置于冰中并在4℃消融，使用预冷的移液管或吸头混合基质胶至均匀状态
。
(b) 在冰上，将基质胶用无血清造就液依照1:8的比例进行稀释，例如取8?l基质胶参与64?l不含血清的造就液中，使用预冷的吸头混合至均匀状态
。

注：常用的稀释比例为1:4、1:6、1:8，可凭据尝试具体情况调整稀释比例
。
(c) 取60?L上述混合溶液垂直参与细胞幼室中，使其均匀平铺在底部
。

(d) 吸出未结合的基质胶
。

(e) 参与100?l不含血清的造就液，将造就板置于37℃造就箱孵育30分钟，进行水化
。
(f) 去除幼室中液体，查抄是否有液体穿过幼室进入到下室中，若没有，则可用于接种细胞
。

b. 细胞悬液的造备：
(a) 对细胞进行12-24幼时的饥饿处置
。（非必须步骤）
(b) 消化细胞，用不含血清的造就液沉悬，调整细胞密度为5-50万个/mL
。

c. 细胞接种：
(a) 取500?L含10% FBS的造就液参与24孔板下室，用镊子将细胞幼室置于24孔板内
。

(b) 取200?L细胞悬液参与细胞幼室
。
(c) 将24孔板置于造就箱中造就24-48幼时
。

d. 细胞固定、染色：
(a) 取出细胞幼室，去除造就液，用棉签轻轻擦拭基质胶及细胞
。
(b) 在24孔板干净的孔中参与600?l 4%多聚甲醛固定液，将幼室放入固定20-30分钟
。
(c) 弃固定液，PBS洗涤幼室1次
。

(d) 在24孔板干净的孔中参与适量结晶紫染色液，将幼室放入染色5-10分钟
。
(e) 取出幼室，PBS洗涤3次
。

(f) 适当风干后，显微镜下观察并计数
。